EXPRESSÃO DE PERFORINA EM CÉLULAS NATURAL KILLER, NK, Sangue Total

Processamento e adequação da amostra

Não manusear;

Estabilidade da amostra:

Temperatura ambiente: não aceitável;

Refrigerada (2-8 ºC): 48h;

Congelada (-20ºC): não aceitável.

Método

A expressão de perforina em células NK é avaliada por citometria de fluxo com marcação intracelular. Após a coleta do sangue periférico, as células NK (CD3?CD56?) são inicialmente identificadas por meio de marcadores de superfície. Em seguida, as células são fixadas e permeabilizadas, permitindo a detecção da perforina com anticorpos monoclonais específicos. A análise é realizada em citômetro de fluxo, possibilitando a quantificação da frequência e da intensidade de expressão dessa proteína em nível celular.

Valor de referência

Normalidade: expressão de perforina acima de 66%

Interpretação e comentários

A avaliação da expressão intracelular de perforina em células NK (natural killer) por citometria de fluxo constitui uma ferramenta diagnóstica para a investigação da competência citotóxica do sistema imunitário inato. A perforina é uma proteína formadora de poros essencial para a lise de células-alvo.

A detecção de níveis reduzidos ou ausêntes de expressão de perforina é sugestiva da deficiência primária dessa enzima, a qual representa a principal causa de hemofagocitose linfohistocítica (HLH) primária. Além disso, alterações na expressão de perforina também podem ser observadas em outras condições clínicas, incluindo infecções agudas ou crônicas, neoplasias hematológicas e uso de imunossupressores. A análise é realizada por meio de marcação intracelular com anticorpos monoclonais específicos, após permeabilização celular, permitindo a quantificação da proteína em células NK.

Importante ressaltar que resultados isolados, especialmente em amostras únicas, devem ser interpretados com cautela. Algumas pacientes carreadores de variantes genéticas que não induzam à alteração estrutural da proteína (p. ex., missense), porém causadoras de perda funcional da mesma, podem apresentar expressão intracelular normal. Por outro lado, variantes genéticas que levam a alterações estruturais na proteína (p. ex., nonsense, frameshift, etc) podem não ser detectadas, caso o sítio mutante ocorra após o epítopo de reconhecimento pelo anticorpo utilizado no método. Dessa maneira, este exame isoladamente não é suficiente para confirmar ou excluir o diagnóstico de HLH, devendo ser interpretado em conjunto com dados clínicos e laboratoriais complementares.