Legionella pneumophila, pesquisa do DNA, vários materiais, Vários Materiais

Orientações do cliente

• Este exame pode ser feito em lavado broncoalveolar, minilavado broncoalveolar, aspirado ou secreção traqueal e escarro.
• O Fleury analisa somente amostras colhidas pelo médico-assistente (não realizamos a coleta do material)), deve ser entregue até 24 horas após a coleta, se mantidas sob refrigeração (2- 8ºC), ou até 72 horas, se mantidas congeladas (abaixo de -20ºC).

Orientações necessárias

• Este exame pode ser feito em lavado broncoalveolar, minilavado broncoalveolar, aspirado ou secreção traqueal e escarro.
• A coleta de lavado broncoalveolar é realizada durante a broncoscopia e, portanto, requer agendamento prévio.
• O Fleury também analisa amostras colhidas pelo médico-assistente, desde que sejam entregues até 24 horas após a coleta, se mantidas sob refrigeração (2- 8ºC), ou até 72 horas, se mantidas congeladas (abaixo de -20ºC).

Processamento e adequação da amostra

• Se houver a solicitação de exames de AP ou MIC na mesma amostra, enviar o material refrigerado (2-8ºC) primeiramente ao setor MIC e as etiquetas código de barras dos demais setores (AP e da BMO) devem estar grampeadas no protocolo específico para envio de amostras nestas condições.
• Se houver somente solicitação de exame para a BMO, manter e enviar a amostra refrigerada ao setor.

__UNIDADES FORA DO ESTADO DE SÃO PAULO

• Se houver a solicitação de exames de AP ou MIC na mesma amostra, enviar o material refrigerado (2-8ºC) primeiramente ao setor MIC e as etiquetas código de barras dos demais setores (AP e da BMO) devem estar grampeadas no protocolo específico para envio de amostras nestas condições.

-Se houver somente solicitação de exame para a BMO, manter e enviar a amostra refrigerada ao setor.

Estabilidade da amostra:

Temperatura ambiente: não aceitável;

Refrigerado (2-8ºC): 24 horas;

Congelado (-20°C): 72 horas.

__UNIDADES DO ESTADO DE SÃO PAULO

• Se houver a solicitação de exames de AP ou MIC na mesma amostra, enviar o material refrigerado (2-8ºC) primeiramente ao setor MIC e as etiquetas código de barras dos demais setores (AP e da BMO) devem estar grampeadas no protocolo específico para envio de amostras nestas condições.

Se houver somente solicitação de exame para a BMO, manter e enviar a amostra refrigerada ao setor.

Estabilidade da amostra:

Temperatura ambiente: não aceitável;

Refrigerado (2-8ºC): 24 horas;

Congelado (-20°C): 72 horas.

Método

PCR Multiplex em Tempo Real (qPCR).

Valor de referência

Indetectado (Negativo).

Interpretação e comentários

O gênero Legionella inclui aproximadamente 90 espécies, das quais mais de 20 espécies são reconhecidas como patogênicas em humanos. A espécie mais frequentemente detectada é a L. pneumophila sorogupo 1, representando cerca de 90% de todas as infecções causadas por Legionella spp. O restante dos casos têm como agente etiológico a L. pneumophila sorogrupos 4 e 6, bem como outras espécies, como L. micdadei, L. bozemanae, L. longbeachae e L. dumoffii.

As bactérias do gênero Legionella podem causar duas formas clássicas de apresentação clínica: a doença dos legionários (DL) e a febre de Pontiac; esta última caracterizada por um quadro agudo com resolução espontânea, semelhante ao observado nos quadros de gripe, porém sem acometimento pulmonar. Já a DL é caracterizada sobretudo por pneumonia grave, comunitária ou hospitalar, acompanhada de febre alta, tosse seca ou produtiva, alterações do estado mental, diarreia, náusea, vômitos e dor abdominal. Outras manifestações incluem miocardite, insuficiência renal e pancreatite. Em pacientes imunodeprimidos, por haver a formação de abscessos.

Uma característica marcante do gênero está em sua dependência de cisteína, além de sua multiplicação apenas em pHs baixos (de 6,7 a 6,9), o que torna necessária a utilização de meios específicos para o diagnóstico microbiológico, distintos daqueles disponíveis na rotina.

Assim, dentre os testes disponíveis para o diagnóstico, estão a imunofluorescência direta (IFD), a pesquisa do antígeno na urina e a pesquisa molecular por PCR. O diagnóstico sorológico usualmente requer a análise de amostras pareadas.

A IFD é realizada em amostras do trato respiratório e tem, como principal limitação, a baixa sensibilidade (25-70%). A pesquisa do antígeno urinário, na maioria dos ensaios, é específica para Legionella pneumophila sorogrupo 1 e apresenta sensibilidade média de 80%.

Esse teste realiza a pesquisa molecular através da metodologia real time PCR (qPCR) sendo altamente sensível (limite de detecção: 300 UFC/mL) e específico (especifidade: 100%) e possibilita o diagnóstico rápido dos diversos sorogrupos da espécie Legionella pneumoniae, além de diferenciar, para fins epidemiológicos, a presença de L. pneumophila sorogrupo 1.

A metodologia utilizada no teste detecta exclusivamente a espécie L. pneumophila, razão pela qual um resultado negativo não exclui o diagnóstico de doença por outro agente do gênero.