M. tuberculosis e resistência à rifampicina, teste rápido, Vários Materiais

Orientações do cliente

• Este exame pode ser realizado em escarro, lavado broncoalveolar, lavado brônquico, secreção traqueal, lavado gástrico, liquor, urina, sangue, medula óssea, líquido ascítico, líquido pleural, líquido sinovial, líquido pericárdico e materiais obtidos por punção aspirativa. Não é realizado em amostras coletadas da mama, seja secreção, aspirado ou fragmento de tecido.

Materiais

Escarro

• É necessário retirar o frasco estéril apropriado e as instruções de coleta em uma das unidades de atendimento do laboratório, uma vez que a amostra deve ser colhida em casa.
• O cliente precisa entregar o material até uma hora após tê-lo colhido, caso a amostra permaneça em temperatura ambiente, ou em 72 horas, se estiver refrigerada (2-8ºC).

Lavado gástrico:

• A coleta desse material requer um jejum de 12 horas e pode ser feita fora do laboratório, desde que o cliente utilize um kit apropriado, disponível em qualquer unidade de atendimento.
• É necessário entregar a amostra no laboratório até uma hora depois da coleta, caso permaneça em temperatura ambiente, ou em 72 horas, se estiver refrigerada e tamponada com carbonato de sódio.

Liquor:

• O liquor tem de ser enviado sob refrigeração, no volume mínimo de 1 mL.
• A amostra se mantém estável por 72 horas se mantida refrigerada (2-8°C).

Urina:

• O cliente deve colher toda a urina da primeira micção da manhã em frasco sem conservante (volume mínimo de 100 mL). Eventualmente, pode-se fazer o exame em amostra colhida em outro horário. A análise, porém, não é efetuada em urina de 24 horas.
• A amostra se mantém estável por 48 horas se mantida refrigerada (2-8°C).

Líquidos ascítico e pleural:

• A coleta pode ser feita no laboratório, guiada por ultrassom, com agendamento prévio.
• Amostras não colhidas no laboratório devem permanecer refrigeradas e ser entregues em até 72 horas após a coleta.

Processamento e adequação da amostra

• Este exame não é realizado em amostras de fezes.
• Este exame pode ser realizado em amostras de escarro, secreção traqueal, lavado brônquico e lavado broncoalveolar, líquor, líquido pleural, pericárdico ou ascítico, fragmentos de tecido (não fixados em formol), urina, lavado gástrico, sangue periférico, medula óssea, secreções obtidas por punção aspirativa.
• Escarro, ou secreção traqueal, lavado broncoalveolar ou lavado brônquico em frasco plástico estéril descartável - mínimo de 2 mL em frasco estéril.
• Urina - mínimo de 100 mL em frasco descartável de 500 mL. O volume pode ser menor em pacientes com insuficiência renal ou em crianças.
• Sangue ou medula óssea - 1 a 4 mL em tubo de EDTA.
• Biópsias/fragmentos de tecidos (não fixados em formol) - fragmento com mínimo de 1x1x1 mm em soro fisiológico estéril
• Líquido ascítico/pleural/pericárdico - 1 a 4 mL em tubo de EDTA; alternativamente a amostra pode ser recebida em frasco estéril sem EDTA. Amostras em heparina são inadequadas.
• Líquor - 1 mL em frasco estéril
• Lavado gástrico - 10 mL de amostra com 100 mg de carbonato de sódio em frasco estéril

Estabilidade da Amostra:

Refrigerada (2 a 8ºC): 72 horas.

Método

• PCR em tempo real - GeneXpert.

Valor de referência

• Negativo

Interpretação e comentários

Os dois maiores diferenciais do teste e do sistema GneXpert são o tempo de análise, que é cerca de 2 horas e o fato do equipamento não necessitar de alocação em área exclusiva para ensaios moleculares. O teste é específico para o Complexo M. tuberculosis (MTB), que compreende as espécies M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti e M. pinnipedii, M. caprae, M. canettii, M. pinnipedii, M. mungi e M. orygis. A versão MTB/Rif Ultra utiliza um alvo adicional (IS1081) para a detecção das espécies do complexo M. tuberculosis e permite também a detecção de cepas desprovidas da IS6110. Além disso, tem maior sensibilidade que a versão anterior para amostras com baciloscopia negativa. Uma publicação recente sobre a performance do GeneXpert MTB/Rif Ultra (Chakravorty S et al., The New Xpert MTB/RIF Ultra: Improving Detection of Mycobacterium tuberculosis and Resistance to Rifampin in an Assay Suitable for Point-of-Care Testing. M Bio 2017; doi:10.1128/mBio.00812-17) indica que a sensibilidade para detecção de MTB em amostras de escarro com baciloscopia negativa é 78,9%, cerca de 19% mais sensível que a versão anterior, mantendo a mesma especificidade de 98,7%. Para a detecção da resistência à rifampicina, a versão MTB/Rif Ultra tem a mesma sensibilidade da versão anterior (92,7%) e especificidade de 98,0%. tem sensibilidade do GeneXpert Ultra em amostras com baciloscopia a versão atual do teste é mais sensível que a anterior. Uma limitação da metodologia é quanto à impossibilidade de avaliar a susceptibilidade à rifampicina quando a carga infectante é próxima ao limite de detecção do teste. Considerando que o teste de detecção de resistência à rifampicina não tem 100% de especificidade, é recomendável a confirmação da resistência por sequenciamento da região determinante da resistência à rifampicina do gene rpoB, sequenciamento completo do genoma ou teste de sensibilidade fenotípico.

Orientações necessárias

Este exame detecta a presença de Mycobacterium tuberculosis e simultaneamente avalia a resistência à rifampicina, principal fármaco utilizado no tratamento da tuberculose. O exame é realizado em diversos tipos de amostras clínicas, exceto fezes.

Escarro

• É necessário retirar o frasco estéril apropriado e as instruções de coleta em uma das unidades de atendimento, uma vez que a amostra deve ser colhida em casa.
• O cliente precisa entregar o material até uma hora após tê-lo colhido, caso a amostra permaneça em temperatura ambiente, ou em 72 horas, se estiver refrigerada (2-8ºC).
• Secreção traqueal
• A coleta pode ser realizada somente em unidades hospitalares.

Lavado broncoalveolar ou brônquico:

• A amostra deve ser coletada pelo próprio médico assistente. Deve ser entregue no laboratório em até uma hora após a coleta, caso permaneça em temperatura ambiente, ou em 72 horas, se estiver refrigerada (2-8ºC).

Lavado gástrico:

• Este tipo de amostra é usualmente coletado de crianças que não conseguem expectorar. A coleta desse material requer um jejum de 6 a 12 horas e é realizada nas unidades que têm Fleury Kids
• A coleta pode ser feita pelo médico assistente desde que o kit para coleta seja retirado em uma das unidades que têm Fleury Kids.
• É necessário entregar a amostra no laboratório até uma hora depois da coleta, caso permaneça em temperatura ambiente, ou em 72 horas, se estiver refrigerada e tamponada com carbonato de sódio.

Líquor:

• No Fleury, a coleta desse material requer agendamento prévio.
• Caso seja colhido pelo médico assistente, o líquor tem de ser enviado sob refrigeração, no volume mínimo de 1 mL.
• A amostra se mantém estável por 72 horas se mantida refrigerada (2-8°C).

Urina:

• O cliente deve colher todo volume da primeira micção da manhã. A coleta deve ser em frasco sem conservante (volume mínimo de 100 mL). A análise não é efetuada em urina de 24 horas.
• A amostra deve ser entregue no laboratório em até uma hora após a coleta, caso permaneça em temperatura ambiente, ou em 72 horas, se estiver refrigerada (2-8ºC).

Líquidos ascítico e pleural:

• A coleta deve ser feita pelo próprio médico assistente. Para coleta no Fleury há necessidade de agendamento prévio.
• A amostra deve ser entregue no laboratório em até uma hora após a coleta, caso permaneça em temperatura ambiente, ou em 72 horas, se estiver refrigerada (2-8ºC).

Medula óssea:

• Caso a coleta seja realizada no Fleury, o cliente também precisa agendar a punção com antecedência.

Fragmentos de tecido/biópsias:

• O material deve ser coletado pelo médico assistente e deve ser acondicionado em soro fisiológico estéril