VÍRUS DENGUE, detecção do RNA por PCR em tempo real, plasma

Orientações do cliente

• Não é necessário preparo para este exame.

Orientações necessárias

• Não é necessário preparo para este exame.

Processamento e adequação da amostra

AMOSTRA: PLASMA

• centrifugar o material por 10 minutos a 2200g a 18 °C, no máximo 8 horas depois da coleta.
• Transferir todo o plasma, com pipeta estéril e evitando tocar a camada de leucócitos, para um tubo plástico de 4 mL estéril.
• Em casos de coleta difícil, o volume mínimo a ser enviado é de 1 mL de plasma.
• Enviar congelado à seção.

PODE SER ACEITA, EVENTUALMENTE, AMOSTRA DE SORO:

AMOSTRA: SORO

• Aguardar 30 minutos.
• Centrifugar a 2.200 g, por 10 minutos, a 18ºC.
• Não aliquotar.
• Enviar a amostra à seção em temperatura ambiente.
• Volume ideal de soro:1 mL.
• Volume mínimo: 0,5 mL.
• NÃO ENVIAR SANGUE TOTAL.

Estabilidade da amostra (plasma ou soro):

Temperatura ambiente: não aceitável;

Refrigerada (2-8 ºC): 8 horas;

Congelada (-20 ºC): 1 mês.

Método

PCR em tempo real.

Limite de detecção do teste: 2000 cp/mL

Valor de referência

• Não detectado.

Interpretação e comentários

A dengue é uma doença febril aguda, acompanhada de forte cefaléia retroorbitária e mialgia. Podem ocorrer casos graves com febre hemorrógico ou choque hemodinâmico, sobre tudo em episódios secundários da doença. A viremia do vírus da dengue (DENV) pode ser detectada de 24 a 48 horas antes do início da febre e persiste por cerca de 5 a 6 dias. Nesse período, é possível identificar o vírus infectante, seu RNA específico e a proteína NS1 no sangue, soro, plasma e até em tecidos de casos fatais. O diagnóstico laboratorial pode ser feito por métodos moleculares ou sorológicos. Entre os métodos moleculares, o RT-PCR convencional ou em tempo real permite confirmar e identificar o agente de forma rápida e específica. A detecção sorológica da proteína NS1 oferece oportunidade para diagnóstico precoce, mas sua sensibilidade varia conforme o sorotipo, o momento da coleta e se a infecção é primária ou secundária. O pico de sensibilidade de ambos os exames ocorrem entre o 3o e 4o dia após o início dos sintomas Em alguns casos, a presença de antígeno NS1 na corrente sanguìnea persiste por tempo mais prolongado que a do RNA.